Мой город Красноярск

ФЕРМЕНТОВ БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ

03.02.07 генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2010 2

Работа выполнена на кафедре генетики ГОУ ВПО «Кемеровский государственный университет» Федерального агентства по образованию и в Учреждении Российской академии наук Институте экологии человека СО РАН

Научный руководитель. кандидат биологических наук, доцент Минина Варвара Ивановна Учреждение Российской академии наук Институт экологии человека СО РАН

Официальные оппоненты. доктор биологических наук, Ингель Фаина Исааковна Учреждение Российской академии медицинских наук НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина РАМН доктор медицинских наук, профессор Викторова Татьяна Викторовна Башкирский государственный медицинский университет

Ведущая организация. Учреждение Российской академии медицинских наук НИИ медицинской генетики СО РАМН

Защита состоится «»_2010 г. в «_» часов на заседании Диссертационного совета ДМ 002.133.01 при Учреждении Российской Академии наук Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН по адресу: Уфа, пр. Октября,

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уфимского научного центра РАН (Уфа, пр. Октября, 71), с авторефератом - на сайте ИБГ УНЦ РАН ibg.anrb.ru/dissov.html e-mail: molgen@anrb.ru Автореферат разослан «_»2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Бикбулатова С.М.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Генетический мониторинг как инструмент для оценки степени реально существующего и прогнозируемого напряжения генетических систем в ответ на воздействие экологических факторов широко используется во всем мире. Цитогенетическое тестирование хромосомных аберраций (ХА) в лимфоцитах крови в качестве «биомаркеров» эффекта занимает в этой системе одну из ключевых ролей [WHO, 1993 Norppa et al. 2006 Liu et al. 2009]. Несмотря на более чем полувековую историю использования цитогенетических методов для изучения спонтанного хромосомного мутагенеза у человека, отдельные аспекты этой фундаментальной проблемы до настоящего времени остаются нерешенными либо изученными в недостаточной степени. В частности, открытым остается вопрос о вариабельности частоты ХА на популяционном уровне с учетом этнического фактора [Бочков и соавт. 1989].

Данный аспект освещен в литературе крайне мало и остается неясным из-за отсутствия унифицированных обследований [Чеботарев, 2001]. Вместе с тем, известно, что каждая популяция обладает собственным уровнем «генетического груза», который может определяться, в том числе эффективной численностью, уровнем инбридинга, особенностями миграционных процессов, климатогеографическими и экологическими параметрами территории проживания и т.п. Находясь в относительной изоляции, отдельные малые этнические группы способны накапливать с высокой частотой ряд мутаций, в том числе ответственных за формирование наследственных патологий, что теоретически может приводить к вымиранию популяций и целых этносов. В этой связи приобретает свою актуальность изучение межэтнических особенностей фонового уровня ХА в сочетании с оценкой генетического полиморфизма по отдельным ферментативным системам, определяющим особенности метаболизма ксенобиотиков и во многом обеспечивающим разнообразие индивидуальных реакций на действие мутагенов среды. К числу таких полиморфных систем относятся гены ферментов I и II фазы биотрансформации ксенобиотиков:

представители семейства цитохрома P450 (CYP1A1, CYP1A2), глутатионовых-Sтрансфераз (GSTМ1, GSTТ1 и GSTP1) [Ревазова и соавт. 2001 Баранов, 2003

Norppa, 2004 Викторова и соавт. 2004 Сидорова, 2005 Григорьева и соавт. 2007

Хрунин, 2008].

Основным методическим условием для проведения такого исследования является унификация экологических и социально-бытовых факторов (одинаковые условия проживания, питания и медицинского обеспечения). Выполнение данного условия возможно при совместном компактном проживании представителей сопоставляемых этнических групп, например, в многонациональных школахинтернатах. Не менее важным является наличие постоянного и выраженного генотоксического воздействия на изучаемые популяции, так как лишь в условиях повышенного мутационного давления можно наиболее полно оценить адаптационную значимость вариантов наследственного полиморфизма.

Эти обстоятельства впервые позволяют исследовать этнический фактор в качестве возможного модификатора мутационного процесса в популяциях человека.

Цель работы. исследование этнических особенностей чувствительности генома к комплексному генотоксическому воздействию среды у детей представителей коренного (шорцы) и пришлого (европеоиды) населения Кемеровской области методом учета хромосомных аберраций в связи с полиморфизмом генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков.

Задачи исследования:

1. Изучить генотоксические (кластогенные) эффекты воздействия факторов окружающей среды у детей - представителей коренного и пришлого населения, проживающих в школе-интернате г. Таштагола Кемеровской области.

2. Оценить генетический полиморфизм по локусам генов I и II фазы биотрансформации ксенобиотиков: CYP1A1 (A2455G), CYP1A1 (T3801C), CYP1A (C163A), GSTМ1 (делеция), GSTТ1 (делеция) и GSTP1 (T341С) у детей представителей коренного и пришлого населения, проживающих в школеинтернате г. Таштагола Кемеровской области.

3. Исследовать взаимосвязь полиморфных вариантов генов I и II фазы биотрансформации ксенобиотиков с хромосомными аберрациями в лимфоцитах периферической крови с учетом этнического фактора.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Впервые исследован этнический фактор в качестве возможного модификатора уровня хромосомных аберраций у детей, находящихся в условиях интенсивного генотоксического воздействия факторов среды (радон, тяжелые металлы). Показано отсутствие значимых отличий в частоте ХА между группами коренного и пришлого населения Кемеровской области (шорцев и европеоидов). Впервые определены частоты аллелей и генотипов полиморфных локусов I и II фазы биотрансформации ксенобиотиков (CYP1А1, CYP1А2, GSTM1, GSTТ1, GSTР1) у шорцев, европеоидов и метисов Кемеровской области. Выявлены этноспецифичные взаимосвязи высоких частот отдельных типов хромосомных аберраций с генотипами ферментов биотрансформации ксенобиотиков: у шорцев - GSTT1 0/0 у европеоидов - CYP1A2 *1A*1A, GSTM1 0/0 у метисов - GSTP1 Val/Val.

Практическая значимость . Изучение связи генетического полиморфизма с ответом на мутагенные воздействия факторов среды позволит формировать группы повышенного генетического риска возникновения экологозависимых заболеваний с учетом этнического фактора. Полученные результаты могут популяционного генетического риска у представителей других этнических групп Кемеровской области.

Внедрение результатов исследования. Результаты диссертационного исследования получены в рамках выполнения НИР по грантам программы президиума РАН «Адаптация народов и культур к изменениям природной среды, социальным и техногенным трансформациям» РФФИ, 07-04-96031-р_урал_а.

государственного контракта ФЦНТП №02.512.11.2233. Результаты используются в учебном процессе (спецкурс «Экологическая генетика» и «Популяционная генетика») на кафедре генетики Кемеровского государственного университета.

Разработано информационно-методическое письмо «Опасность возникновения хромосомных нарушений у школьников при наличии высокого содержания радона в зданиях общеобразовательных учреждений», утвержденное Департаментом охраны здоровья населения Кемеровской области и рекомендованное для использования в работе организаций в сфере социально-гигиенического мониторинга, здравоохранения, образования.

Апробация диссертации. Основные положения и результаты научных исследований были доложены на XXXII конференции студентов и молодых ученых КемГУ (Кемерово, 2005) Межвузовской молодежной конференции «Студенчество. Интеллект. Будущее» (Набережные Челны, 2005) XLIII международной научной студенческой конференции «Студент и научно – технический прогресс» (Новосибирск, 2005) IX Всероссийском популяционном семинаре «Особь и популяция - стратегии жизни» (Уфа, 2006) I международной научно–практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых (Кемерово, 2006) межрегиональной научно–практической конференции «Этносы развивающейся России: проблемы и перспективы» (Абакан, 2006) 5th International Conference on Environmental Mutagens in Human Populations (Antalya, 2007) XII Всероссийской научно-практической конференции (Томск, 2008) 6th Conference of the Pan African Environmental Mutagen Society (Cape Town, 2008).

Публикации. Результаты исследования опубликованы в 16 печатных работах, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 136 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 317 источников, из них 155 работ зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 23 таблицами и 20 рисунками.

Благодарности. Автор выражает благодарность научному руководителю д.б.н. профессору В.Г. Дружинину и научному консультанту к.б.н. доценту В.И. Мининой, а также д.м.н. профессору А.Н. Глушкову за помощь в обучении методам цитогенетического, молекулярно-генетического исследования и обсуждении результатов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Группы для исследования частоты хромосомных аберраций и полиморфизма генов системы биотрансформации ксенобиотиков в 2004, 2007 и 2009 гг.

формировали из детей и подростков, проживающих и обучающихся в школеинтернате г. Таштагола Кемеровской области: 211 человек в возрасте от 8 до лет. Этнический состав данной выборки: шорцы – 133 (63%), европеоиды – (18%), метисы – 40 (19%). В качестве группы сравнения (только для цитогенетических показателей) использовали выборку доноров, проживающих в с. Красное Ленинск-Кузнецкого района Кемеровской области, расположенного в удалении от промышленных зон Кузбасса: 41 человек (10 мальчиков и 31 девочка в возрасте 13-16 лет), а также данные о фоновом уровне хромосомных мутаций в группе регионального базисного контроля из числа подростков, проживающих в экологически чистых деревнях Кузбасса: 95 человек (70 мальчиков и 25 девочек в возрасте 10-16 лет) [Дружинин, 2003]. Измерение удельной объемной активности радона в местах постоянного пребывания детей (учебные и жилые помещения) было выполнено для опытной (школа-интернат г. Таштагола) и контрольной выборки (с. Красное). В результате измерений установлено, что в Таштаголе во все годы исследования изученные показатели значительно превышали нормативы (200 Бк/м3), установленные для эксплуатируемых зданий и составили 408,8 Бк/м3, в то время как в с. Красное данные значения соответствовали нормативам ( Бк/м3). Кроме того, для сравнения были использованы ранние (1992 год) данные цитогенетического исследования подростков из Горной Шории [Дружинин и соавт. 1995].

Сбор анамнестических данных проводили путем устного анкетирования и анализа медицинских карт (форма 025/у-87). Учитывали наличие хронических и инфекционных заболеваний, курения, прием лекарственных препаратов и рентгенодиагностические процедуры за 3 месяца до сбора материала. С учетом данных литературы [Чеботарев, 2001] о сезонных колебаниях спонтанного уровня ХА сбор образцов биологического материала (венозная кровь) проводили в зимний период. В соответствии с графиком учебного процесса все обследованные дети как минимум в течение 3-х месяцев до сбора материала находились в образовательном учреждении. На каждого обследуемого ребенка был оформлен протокол информированного согласия, подписанный родителями, либо лицами, осуществляющими опеку несовершеннолетних.

Цитогенетический анализ. Генотоксические эффекты в лимфоцитах крови изучали с помощью метода учета ХА в кратковременных культурах лимфоцитов периферической крови. Подготовку препаратов метафазных хромосом осуществляли с использованием стандартного полумикрометода [Hungerford, 1965]. Учет ХА проводили без кариотипирования. Отбор метафаз, включаемых в анализ, и критерии для регистрации цитогенетических нарушений соответствовали общепринятым рекомендациям [Бочков, 1971 Carrano et al. 1988]. В среднем на каждого индивида анализировали по 185 метафаз (100 – 500).

Результаты цитогенетического анализа заносили в электронную базу данных.

Молекулярно-генетический анализ. Тестирование генетического полиморфизма систем биотрансформации ксенобиотиков I и II фазы проведено на образцах ДНК, выделенной из лейкоцитов периферической крови стандартным методом фенольно-хлороформной экстракции [Sambrook et al. 1989].

Протяженные делеции в генах GSTM1 и GSTT1 анализировали с помощью наборов реактивов ООО «СибДНК» (Новосибирск) путем амплификации специфических участков исследуемых генов с флуоресцентной детекцией результатов в режиме реального времени (Real-time PCR). Полиморфизмы локусов 2455АG гена CYP1A1, 341CT гена GSTР1 определяли с использованием набора «SNPэкспресс» (НПФ «Литех», Москва). Полиморфизмы локуса 163 СА гена CYP1A и 3801ТС гена CYP1A1 исследовали методом ПЦР-ПДРФ с использованием наборов ООО «СибДНК» (г. Новосибирск). ПЦР проводили на амплификаторах ТЕРЦИК (ДНК-Технология, Россия). Для рестрикции использовали рестриктазу Bst2U. Амплифицированные фрагменты ДНК разделяли электрофоретически в горизонтальном 3% агарозном и в вертикальном 6% полиакриламидном геле.

После окончания электрофореза гель окрашивали раствором бромистого этидия и визуализировали в проходящем ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты изучения хромосомных аберраций в исследуемых группах представлены в таблице 1. Из данных таблицы следует, что основной цитогенетический показатель – доля аберрантных метафаз в группах детейподростков из школы-интерната г.Таштагол достоверно увеличен по сравнению с аналогичным показателем для контрольных выборок: базисная контрольная группа (U=4565,0 p0,0001), с. Красное (U=2303,5 p0,0001). Значения отдельных категорий аберраций: хроматидных, хромосомных разрывов и обменов хромосомного типа также были достоверно выше в выборках детей из Таштагола в сравнении с контрольной группой.

В контрольной выборке, сформированной из жителей с. Красное, наблюдалось достоверное увеличение доли аберрантных метафаз и разрывов хроматидного типа по сравнению с базисным контролем, что может свидетельствовать о воздействии на данную выборку неучтенных факторов.

Динамика показателей частоты аберрантных метафаз, выявленная в результате мониторинга аберраций в выборках воспитанников школы-интерната г. Таштагола в разные годы, показала стабильно высокие значения фоновых цитогенетических нарушений, по сравнению с базисной контрольной группой. Особенно важен тот факт, что обмены хромосомного типа (включающие дицентрические и кольцевые хромосомы) также чаще регистрировались у детей-подростков из Горной Шории во все годы исследования. Известно, что эта категория аберраций является маркером воздействия радиации [Бочков, 1993 Brooks et al. 1993].

При исследовании популяционного уровня цитогенетических нарушений значение имеет оценка целого комплекса факторов, потенциально способных влиять на средние значения этих показателей. К их числу относят: пол и возраст обследуемых [Ramsey et al. 1995 Rossner et al. 1998 Stephan, Pressl, 1999 Бочков и соавт. 2001], заболеваемость и наличие вредных привычек (курение) [Bolognesi et al. 1997 Pluth et al. 2000]. Оценка всех перечисленных факторов показала отсутствие их влияния на частоты основных типов ХА, зарегистрированных в исследованных выборках.

Хромосомные аберрации в группах детей-подростков из школы-интерната г. Таштагола Кемеровской области 2004- контрольная группа (1986–2001) Достоверно отличается от значений для контрольной группы (с. Красное) и базисной контрольной группы: * p0,05

** p0,01 *** p0,001.

Достоверно отличается от значения для базисной контрольной группы: # p0, Наличие выраженных и стабильно воспроизводящихся генотоксических эффектов в исследуемой выборке требует оценки экологических факторов, способных индуцировать цитогенетические нарушения в лимфоцитах.

Сотрудниками лаборатории радиационного контроля Кемеровского госуниверситета в жилых и общественных помещениях школы-интерната выполнены измерения мощности эквивалентной дозы внешнего -излучения и удельной объемной активности радона, а также концентрации тяжелых металлов в образцах почв, отобранных на территории интерната. В результате проведенных исследований установлено, что контингент воспитанников школы-интерната подвержен хроническому воздействию радона и, вероятно, отдельных тяжелых металлов. Следствием такого воздействия является высокий уровень ХА в лимфоцитах крови, стабильно воспроизводящийся во времени.

Максимальная унификация условий проживания представителей разных этнических групп в исследуемой выборке: единое генотоксическое воздействие, характер питания, медицинское обслуживание, единый сезон проведения обследования, отсутствие модифицирующего влияния половозрастных особенностей, курения и заболеваний, впервые позволило провести сравнительное межэтническое изучение фонового уровня хромосомных мутаций (табл. 2).

Общая частота различных типов хромосомных аберраций в группах, дифференцированных по этнической принадлежности Аберрантные метафазы, % 5,22 ± 0,21 4,89 ± 0,38 5,84 ± 0, Число аберраций на 100 клеток 5,37 ± 0,22 5,07 ± 0,42 6,05 ± 0, Обмены хромосомного типа 0,24 ± 0,04 0,18 ± 0,05 0,28 ± 0, Установлено, что частоты основных типов цитогенетических повреждений в сопоставляемых этнических выборках достоверно не различаются (p0,05).

Однако, результаты межэтнического сопоставления уровня ХА, приведенные в данном разделе, не позволяют однозначно утверждать, что фактор метисации не способен модифицировать ответ генома на выраженную генотоксическую нагрузку. Для подтверждения наличия или отсутствия эффекта влияния этнической компоненты требуются дальнейшие исследования, предполагающие существенное увеличение сопоставляемых выборок.

Сравнительная характеристика полиморфизма генов ферментов биотрансформации ксенобиотиков у детей и подростков школы-интерната г. Таштагола Кемеровской области Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных локусов A2455G и Т3801С гена CYP1А1, С163А гена CYP1А2 у шорцев, европеоидов и метисов не выявил достоверно значимых межгрупповых различий (табл. 3).

Распределение частот генотипов генов I фазы биотрансформации ксенобиотиков в трех этнических группах Кемеровской области CYP1А1 A2455G *1А*1А 44,63 (54) 55,26 (21) 52,63 (20) CYP1А1 Т3801С *1А*1А 35,43 (45) 50,00 (19) 42,50 (17) При сравнении распределений частот аллелей и генотипов полиморфизма A2455G гена CYP1А1 (*1А*1А, *1А*2С, *2С*2С) у шорцев и тундровых ненцев было обнаружено сходство: 40,19% (2=0,02 p=0,89), 50% (2=0,09 p=0,77), 9,80% (2=0,03 p=0,87). Тундровые ненцы представляют уникальную природную модель европеоидно-монголоидной популяции [Дужак и соавт. 1998], также подвергающейся воздействию радиационного фактора. Распределение частот аллелей и генотипов CYP1А1 (A2455G) у шорцев (2=0,00 р=0,99), европеоидов (2=0,42 р=0,52) и метисов (2=0,16 р=0,69) соответствовала таковым в группе экспонированных диоксинами детей из Вьетнама (*1А*1А - 46%, *1А*2С - 50%, *2С*2С - 4%) [Сидорова, 2005].

Сравнительный анализ полиморфного локуса Т3801С гена CYP1А1 показал, что у шорцев (2=43,82 р=0,000), европеоидов (2=5,51 р=0,02) и метисов (2=11,15 р=0,0008) частота генотипа *1А*1А достоверно более низкая, чем у детей из г. Уфы (70,33%), а частота генотипа *2А*2А соответствовала последним (2,33%, во всех случаях 20,27, р0,60) [Корытина и соавт. 2007].

При сравнении данных показателей с телеутами, коренной малочисленной народностью, проживающей в Беловском районе Кемеровской области, показано, что частоты аллелей *1А (71,6%) и *2А (28,4%) соответствуют таковым у шорцев (2=1,28 р=0,56), европеоидов (2=0,00 р=0,99) и метисов (2=0,01

р=0,83) [Остапцева, 2008].

Сравнение частот генотипов CYP1А2 в группе детей-подростков из школы – интерната г. Таштагола с выборкой здоровых детей из г. Уфы (*1F*1F–41,67%, *1А*1F–50,33%, *1А*1А–8,00%) [Корытина и соавт. 2007], показало отсутствие достоверно значимых отличий (во всех случаях 22,23 р0,13). Частоты генотипов CYP1А2 (*1A*1A, *1А*1F, *1F*1F) у шорцев, европеоидов и метисов соответствовали таковой в группе телеутов, проживающих на территории Кемеровской области (6,80%, 40,4%, 52,8%) [Остапцева, 2008] (во всех случаях 22,59 р0,11).

Анализ частот генотипов генов II фазы биотрансформации ксенобиотиков выявил существенные отличия этнической группы европеоидов от шорцев и метисов по гену GSTM1 (табл. 4). Частота нулевого генотипа GSTM1 у шорцев (2=57,59 р=0,000), европеоидов (2=10,99 р=0,0009) и метисов (2=40,87

р=0,000) оказалась достоверно более низкой по сравнению с экспонированной группой детей из Вьетнама (68,0%) [Сидорова, 2005].

Распределение частот генотипов GSTM1 в выборках шорцев (2=0,03 р=0,86) и метисов (2=3,47 р=0,06) соответствовало таковым у телеутов Кемеровской области (10,82% - GSTM1 0/0 и 89,17% - GSTM1 «+»), у европеоидов частота генотипа GSTM1 0/0 достоверно превышала таковую у телеутов (2=7,20 р=0,007) [Остапцева, 2008].

Распределение частот генотипов генов II фазы биотрансформации ксенобиотиков в трех этнических группах Кемеровской области GSTР1 C341T генотипы Ala/Ala 65,00 (78) 58,33 (21) 56,41 (22) * 2=6,71, р=0,01 достоверно значимые отличия от европеоидов ** 2=11,55,р=0,0007 достоверно значимые отличия от европеоидов При сравнении частот генотипов гена GSTМ1 с группой детей из г. Уфы (58,67%) [Корытина и соавт. 2007], детьми из Центрального региона РФ (54,0%) [Кузнецова и соавт. 2006] и контрольной группой детей из г. Томска (63,9%) [Огородова и соавт. 2007], показано, что генотип GSTМ1 «+» встречался с достоверно более высокой частотой у шорцев (2=37,49 р=0,00001 2=45,46

р=0,00001 2=22,69 р=0,00001, соответственно) и метисов (2=24,27 р=0,00001

2=28,48 р=0,00001 2=18,39 р=0,00001, соответственно), а в группе европеоидов значимых различий не обнаружено (2=1,40 р=0,24 2=2,80 р=0,09 2=0,28

р=0,59, соответственно). У европеоидов из Таштагола частота генотипа GSTМ1 0/ оказалась сопоставимой с таковой в группе детей из Оренбурга (48,0%, 2=2,90

р=0,09), в то время как у шорцев и метисов данный показатель был достоверно ниже (2=37,20 р=0,0001 и 2=26,86 р=0,0001, соответственно).

Частота генотипа GSTТ1 0/0 у европеоидов (2=4,09 р=0,04) и метисов (2=4,73 р=0,03) оказалась достоверно ниже, а у шорцев (2=0,63 р=0,43) соответствовала таковой у телеутов (21,10% - GSTТ1 0/0 и 78,90% - GSTТ1 «+»

[Остапцева, 2008]. Генотип GSTТ1 0/0 у шорцев (2=9,50 р=0,002), европеоидов (2=11,70 р=0,0006) и метисов (2=12,91 р=0,0003) встречался с достоверно низкой частотой по сравнению с детьми из Вьетнама (40,0%) [Сидорова, 2005].

При сравнении частот генотипов гена GSTТ1 в Таштагольской выборке с группой детей из г. Уфы (78,67%) [Корытина и соавт. 2007], детьми из Центрального региона РФ (78,0%) [Кузнецова и соавт. 2006] и контрольной группой детей из г. Томска (78,2%) [Огородова и соавт. 2007] показано, что шорцы по частоте генотипа GSTТ1 «+» не имели достоверно значимых отличий (2=0,84, р=0,36 2=1,04, р=0,31 2=0,75, р=0,39, соответственно), тогда как у европеоидов (2=4,34, р=0,04 2=4,55, р=0,03 2=4,22, р=0,04, соответственно) и метисов (2=5,02, р=0,02 2=5,25, р=0,02 2=4,87, р=0,03) данный генотип встречался с достоверно более высокой частотой. У шорцев из г.Таштагола частота нулевого генотипа GSTТ1 оказалась сопоставимой с таковой в группе детей из Оренбурга (26,0%, 2=2,26 р=0,13), в то время как у европеоидов и метисов данный показатель был достоверно ниже (2=5,81, р=0,01 и 2=6,59, р=0,01, соответственно).

При сравнении полученных результатов с данными обширных исследований частот генов биотрансформации ксенобиотиков в контрольных выборках, включающих свыше 15000 человек [Garte et al. 2001], можно отметить значительное снижение частот делеционных генотипов GSTM1 и GSTТ1 в изученных группах шорцев, европеоидов, метисов, что может быть обусловлено как небольшим объемом выборки, так и, возможно, процессами адаптации к генотоксическому воздействию среды. Сходство в распределении частот аллелей и генотипов между шорцами, европеоидами и метисами может свидетельствовать о происходящей метисации шорцев.

При сравнении частот генотипов гена GSTP1 у детей г. Таштагола с группой детей из г. Уфы установлено, что генотип Ala/Ala у детей из школы-интерната (шорцы: 2=14,47 р=0,0001 европеоиды: 2=10,34 р=0,001 метисы: 2=13,86

р=0,0002) встречался с достоверно более низкой частотой, а гетерозиготный генотип, наоборот, с достоверно более высокой частотой, чем у детей из Уфы (82,42% и 15,76%, соответственно). Частота генотипа Val/Val у европеоидов (2=0,73 р=0,39) и шорцев (2=3,73 р=0,05) соответствовала таковой в группе детей из Уфы (1,82%), а у метисов частота данного генотипа оказалась более высокой (2=6,49 р=0,01), чем у последних.

Анализ взаимосвязей полиморфизмов генов I и II фазы системы биотрансформации ксенобиотиков с цитогенетическими нарушениями у детей и подростков школы-интерната г. Таштагола Кемеровской области Учитывая литературные данные о молекулярных механизмах неодинаковой генотоксической чувствительности к факторам среды [Бочков, 1971 Пономарева, 2004 Цепенко, 2004] и молекулярно-генетических маркерах риска развития различных хронических заболеваний [Ляхович и соавт, 2000 Фрейдин и соавт. 2002 Корытина и соавт. 2003, 2007, 2009 Брагина и соавт. 2005 Огородова и соавт. 2007 Макарова, 2004 Янбаева, 2004 Полоников, 2006 Ахмадишина, 2007, 2008 Кочетова, Викторова, 2007 Баранов, 2009], нами также предпринята (предрасполагающие) генотипы на основании анализа цитогенетического статуса (частоты хромосомных повреждений) у детей-подростков школы-интерната г. Таштагола. Выполнено попарное сравнение генотипов изученных полиморфных локусов с частотами основных типов хромосомных нарушений, выявленных в кратковременных культурах лимфоцитов периферической крови.

Анализ частот ХА в зависимости от полиморфизмов Т3801С и A2455G гена CYP1А1 в группах шорцев, европеоидов и метисов, с учетом поправки на множественность сравнений, показал отсутствие достоверно значимых отличий.

Анализ частот ХА у детей-подростков в зависимости от генотипов CYP1А показал, что в группе европеоидов генотип *1А*1А связан с высокой частотой хромосомных повреждений. Так, доля аберрантных метафаз при генотипе *1А*1А составила 7,73±0,80% по сравнению с генотипом *1А*1F - 4,23±0,45% (pcor=0,004).

Для шорцев и метисов по данному полиморфному локусу достоверно значимых отличий в частоте ХА выявлено не было.

Анализ частот ХА в зависимости от генотипов генов GSTM1 и GSTТ1 в общей группе детей-подростков не выявил достоверно значимых отличий. Однако, при проведении данного анализа с учетом этнического фактора, показано, что в группах шорцев и европеоидов делеционные генотипы генов GSTM1 и GSTТ периферической крови. Так, частота множественных хромосомных повреждений у шорцев при генотипе GSTТ1 0/0, а у европеоидов при генотипе GSTM1 0/ составили 0,23±0,08 и 0,41±0,15%, соответственно, по сравнению с соответствующими GST «+» генотипами – 0,09±0,02 (р=0,04) и 0,06±0,03% (p=0,004). У метисов подобной взаимосвязи не выявлено.

Анализ частот ХА в соответствии с полиморфным локусом GSTР1 в общей группе детей-подростков не выявил никаких взаимосвязей. Однако, при проведении данного анализа с учетом этнического фактора, показано, что в группе метисов высокая частота встречаемости дицентрических хромосом взаимосвязана с генотипом GSTР1 Val/Val (0,50±0,20, рcor=0,0001), по сравнению с Ala/Ala (0,02±0,02) и Ala/Val (0,00). В то же время малый объем выборки и низкая частота встречаемости дицентриков у доноров, дифференцированных в зависимости от генотипов GSTР1, заставляет с осторожностью относиться к полученным результатам. У шорцев и европеоидов по данному полиморфному локусу никаких взаимосвязей не выявлено.

Проведенный анализ взаимосвязей генотипов ферментов биотрансформации ксенобиотиков с частотами хромосомных повреждений в трех этнических группах Кемеровской области позволил выделить так называемые протективные и предрасполагающие генотипы (табл. 5).

Генотипы I и II фазы биотрансформации ксенобиотиков «Протективное» сочетание - устойчивый генотип «Предрасполагающее» сочетание чувствительный генотип На следующем этапе исследования был выполнен анализ частоты ХА в зависимости от парных комбинаций генотипов. Анализ ХА в изученных группах при сочетании генотипов ферментов I фазы биотрансформации ксенобиотиков показал особенности взаимосвязей тех или иных комбинаций с высокими частотами основных типов ХА. Так, у шорцев такими сочетаниями оказались: а) CYP1A1 Т3801С *1А*1А/CYP1A1 A2455G *1А*1А Т3801С 1А*1А(*1А*2А) /A2455G *1А*2С, при которых доля аберрантных метафаз составила от 5,67±0,42 до 6,10±0,69, по сравнению с сочетанием Т3801С *1А*2А/A2455G *1А*1А - 4,24±0, (р0,03) б) CYP1A1 Т3801С *1А*1А/CYP1A2 *1A*1F, при котором аберрации хромосомного типа составили 2,09±0,37, по сравнению с CYP1A1 Т3801С *1А*2А/CYP1A2 *1F*1F -1,17 ±0,17 (р=0,04).

Для выборки метисов такими сочетаниями оказались: а) CYP1A1 Т3801С 1А*1А/CYP1A1 A2455G *1А*2С, при которых доля аберрантных метафаз и аберраций хроматидного типа составила 6,17±0,77 и 5,33±0,82, соответственно, по сравнению с сочетанием CYP1A1 Т3801С 1А*2А/CYP1A1 A2455G *1А*1А р=0,04) и 2,96±0,25 (р=0,02). Высокая частота аберраций хроматидного *1А*2А/CYP1A1 A2455G *1А*2С (4,77±0,75), по сравнению с комбинацией CYP1A1 Т3801С 1А*2А/CYP1A1 A2455G *1А*1А (р=0,04) б) CYP1A1 A2455G *1А*2C/CYP1A2 *1А*1F, при котором частота аберраций хроматидного типа составила 5,01±0,65, по сравнению с CYP1A1 A2455G *1А*1А/CYP1A2 *1F*1F р=0,03).

*1А*2А/CYP1A1 A2455G *1А*2С, при которых аберрации хроматидного типа встречались с частотой 4,33±0,75, по сравнению с сочетанием CYP1A1 Т3801С *1А*1А/CYP1A1 A2455G *1А*1А – 2,26±0,40 (р=0,04).

биотрансформации ксенобиотиков в изученных группах выявил комбинации, взаимосвязанные с высоким уровнем повреждения хромосом:

У шорцев - GSTP1 Ala/Ala/GSTМ1 0/0 взаимосвязаны с высоким уровнем аберраций хромосомного типа (2,65±0,58), по сравнению с GSTP1 Ala/Ala / GSTМ1«+» - 1,35±0,15 (р=0,02) и GSTP1 Ala/Val/GSTМ1«+» - 1,41±0,18 (р=0,04)

GSTМ1 0/0/GSTТ1 «+», при котором парные фрагменты встречались с частотой 2,04±0,58, по сравнению с GSTМ1«+»/GSTТ1«+» - 1,11±0,09 (рcor=0,04).

У европеоидов - GSTМ1 0/0/GSTТ1 «+», при котором множественные ХА встречались с частотой 0,41±0,15 по сравнению с GSTМ1«+»/GSTТ1«+»-0,06±0, (рcor=0,01).

У метисов - GSTМ1«+» (GSTТ1«+»)/GSTP1 Val/Val, при которых дицентрики встречались с частотой 0,51±0,20, по сравнению с сочетанием с GSTP1 Ala/Ala рcor=0,002).

Анализ ХА при сочетании генотипов ферментов I и II фазы биотрансформации ксенобиотиков выявил высокую частоту основных типов ХА у шорцев и европеоидов при сочетании CYP1A1 Т3801С и A2455G с GSTТ1 0/0 и GSTМ1 0/0.

Анализ ХА при сочетании генотипов CYP1A2 с GSTМ1 и GSTТ1 показал, что у европеоидов при наличии хотя бы одного аллеля *1F гена CYP1A2 основные типы хромосомных повреждений встречались с достоверно низкой частотой, по сравнению с сочетанием генотипов CYP1A2 *1А*1А/GSTМ1 0/0 (р=0,01) и CYP1A *1А*1А/GSTТ1 «+» (р=0,01). Так, доля аберрантных метафаз при таких сочетаниях составила 8,33±0,73 и 7,72±0,79, соответственно.

У шорцев при сочетании генотипов CYP1A2 и GSTТ1 выявлена высокая частота встречаемости кольцевых хромосом при комбинации CYP1A2 *1А*1F / GSTТ1 «0/0» (0,32±0,15), по сравнению с CYP1A2 *1F*1F / GSTТ1 «+» - 0,05±0, (рcor=0,05).

При комбинации генотипов CYP1A1 Т3801С, A2455G и CYP1A2 с GSTP выявлены следующие сочетания, взаимосвязанные с высоким уровнем ХА:

- у европеоидов - CYP1A1 Т3801С *1А*1А/GSTP1 Ala/Ala, при котором аберрации хромосомного типа встречались с частотой 1,99±0,26, по сравнению с сочетанием CYP1A1 Т3801С *1А*2А/GSTP1 Ala/Ala – 1,25±0,21 (р=0,04) высокая частота доли аберрантных метафаз и аберраций хроматидного типа наблюдалась при сочетании CYP1A2 *1А*1А/GSTP1 Ala/Val (7,72±0,79 и 6,91±0,94), по сравнению с сочетаниями с генотипом CYP1A2, содержащим аллель *1F.

- у шорцев - CYP1A1 A2455G *1А*2С/GSTP1 Ala/Val, при котором доля аберрантных метафаз составила 5,46±0,34, по сравнению с CYP1A1 A2455G *1А*1А/GSTP1 Val/Val – 3,67±0,44 (р=0,04) высокая частота встречаемости кольцевых хромосом наблюдалась при комбинации генотипов CYP1A1 A2455G *1А*1А/GSTP1 Ala/Ala – 0,06 ±0,04 (р=0,03).

Таким образом, анализ частоты ХА при различных сочетаниях генотипов генов I и II фазы ферментов биотрансформации ксенобиотиков в трех этнических группах Кемеровской области обнаружил особенности в проявлении предрасполагающей значимости тех или иных сочетаний генотипов.

Межэтническое сравнение частот ХА при одних и тех же сочетаниях генотипов генов ФБК I и II фазы обнаружило существенные различия (рис. 1-3).

При сочетаниях: CYP1A2 *1А*1F/GSTМ1 «+» CYP1A1 Т3801С *1А*1А/CYP1A *1А*1F доля аберрантных метафаз у европеоидов была достоверно ниже, чем у метисов (рис. 1). При сравнении групп вводилась поправка на множественность сравнений (во всех случаях рcor0,05).

Рисунок 1. Сочетания генотипов с достоверно значимыми межэтническими различиями по доле аберрантных метафаз.

Аберрации хромосомного типа у шорцев с комбинациями: CYP1A1 A2455G *1А*1А/GSTТ1 «+» CYP1A1 Т3801С *1А*2А/GSTM1 «+» CYP1A1 Т3801С *1А*2А/GSTТ1 «+» GSTМ1 «+»/GSTТ1 «+» GSTP1 Val/Val/GSTТ1 «+»

встречались с достоверно низкой частотой, чем у метисов (рис. 2).

Рисунок 2. Сочетания генотипов с достоверно значимыми межэтническими различиями по частоте аберраций хромосомного типа.

Аберрации хроматидного типа у европеоидов с генотипами CYP1A1 Т3801С *1А*1F/GSTМ1 «+» встречались с достоверно низкой частотой по сравнению с метисами и шорцами. Однако при сочетании CYP1A2 *1А*1А/GSTТ1 «+» частота аберраций хроматидного типа у европеоидов оказалась выше, чем у шорцев (рис.

3).

Рисунок 3. Сочетания генотипов с достоверно значимыми межэтническими различиями по частоте аберраций хроматидного типа.

Проведенный анализ взаимосвязей полиморфизмов генов I и II фазы системы биотрансформации ксенобиотиков с цитогенетическими нарушениями подтвердил «предрасполагающих» генотипов [Сидорова, 2004, 2005 Григорьева, 2007] и показал, что в группе шорцев, европеоидов и метисов адаптивную значимость проявили разные «протективные» генотипы и их комбинации.

Анализ сочетаний аллельных вариантов генов разных фаз детоксикации в исследованиях, направленных на оценку риска воздействия ксенобиотиков с обсуждаемом направлении поможет более полно понять причины возникновения популяции и подобрать методы профилактики, позволяющие их предотвратить.

ВЫВОДЫ

1. Установлен высокий уровень хромосомных аберраций в лимфоцитах крови воспитанников школы-интерната г. Таштагола Кемеровской области, по Модифицирующего влияния этнического фактора на реализацию генотоксических эффектов воздействия факторов окружающей среды не выявлено.

2. Определены частоты аллелей и генотипов полиморфных локусов I и II фазы биотрансформации ксенобиотиков (CYP1А1, CYP1А2, GSTM1, GSTТ1, GSTР1) у Этноспецифические особенности распределения частот выявлены только по локусу GSTM1, по которому обнаружено статистически значимое уменьшение частоты делеционного генотипа в выборках шорцев и метисов, по сравнению европеоидами.

3. Показаны этноспецифические взаимосвязи «предрасполагающих»

генотипов с высокими уровнями отдельных типов хромосомных аберраций: у шорцев - GSTТ1 0/0 у европеоидов - GSTM1 0/0, CYP1A2 *1А*1А у метисов генотип Val/Val гена GSTР1.

4. Выявлены межэтнические различия комбинаций генотипов ферментов биотрансформации ксенобиотиков, взаимосвязанных с высоким уровнем хромосомных нарушений у воспитанников школы-интерната г. Таштагола Кемеровской области.

1. Ахматьянова В.Р. Остапцева А.В. Шабалдин А.В. Глушков А.Н. Дружинин В.Г. Минина В.И. Савченко Я.А. Глушкова О.А. Ульянова М.В. Хрипко Ю.И, Филиппенко М.Л. Полиморфизм генов глутатион-S-трансфераз М1 и Т1 (GSTM1 и GSTT1) у коренного и пришлого населения Кемеровской области // Генетика. – 2008. – Т. 44. - № 4. – С. 539-542.

2. Дружинин В.Г. Ахматьянова В.Р. Головина Т.А. Волков А.Н. Минина В.И. Ларионов А.В. Макеева Е.А. Чувствительность генома и особенность проявления генотоксических эффектов у детей - подростков, подвергающихся воздействию радона в учебных и жилых помещениях школы-интерната // Радиационная биология. Радиоэкология. – 2009. – Т. 49. – № 5. – С. 568-573.

3. Минина В.И. Дружинин В.Г. Глушков А.Н. Головина Т.А. Апалько С.В. Волков А.Н. Ахматьянова В.Р. Лунина А.А. Ларионов А.В. Генотоксические эффекты комплексного воздействия радона и тяжелых металлов в зависимости от полиморфизма генов ферментов монооксигеназной системы // Экологическая генетика. - 2009. - Т. 7. - №3. – С. 53-60.

4. Дружинин В.Г. Минина В.И. Волков А.Н. Головина Т.А. Ахматьянова В.Р. Осипова Н.Н. Факторы модификации фонового уровня хромосомных аберраций в малых этнических группах // Материалы V съезда Российского общества медицинских генетиков (часть 1) «Медицинская генетика». – Москва С. 180.

5. Остапцева А.В. Ахматьянова В.Р. Минина В.И. Глушков А.Н.

Полиморфизм гена CYP1A2 и функциональная активность рибосомных генов у телеутов Кемеровской области // Материалы Международной научной школыконференции студентов и молодых ученых «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий». – Абакан: Изд-во Хакасского госуниверситета им.

Н.Ф. Катанова, 2005. – С. 136.

6. Дружинин В.Г. Ахматьянова В.Р. Головина Т.А. Макеева Е.А. Фоновый уровень хромосомных аберраций в лимфоцитах крови человека с учетом этнического фактора // Материалы докладов IX Всероссийского популяционного семинара «Особь и популяция - стратегии жизни». - Уфа. – 2006. – С. 474-479.

7. Дружинин В.Г. Шабалдин А.В. Мальцев А.В. Головина Т.А. Ахматьянова В.Р. Уровень мутаций хромосом в лимфоцитах периферической крови детейподростков из Горной Шории с учетом экологического и этнического факторов // Медицина в Кузбассе. – 2007. - № 2. – С. 24-28.

8. Ахматьянова В.Р. Остапцева А.В. Шабалдин А.В. Глушкова О.А. Макарченко О.С. Минина В.И. Савченко Я.А. Оценка полиморфизма генов GSTM1 и GSTT1 у шорцев и русских Кемеровской области / Материалы II (XXXIV) Международной научно-практической конференции / КемГУ – Кемерово: ООО «ИНТ», 2007. - Вып. 8. – Т. 1. – C. 311-312.

9. Остапцева А.В. Ахматьянова В.Р. Шабалдин А.В. Дружинин В.Г. Глушков А.Н. Минина В.И. Полиморфизм GSTM1 у телеутов и шорцев Кемеровской области // Материалы I Всероссийской научно-практической конференции «Состояние окружающей среды и здоровье населения». - Курган. С. 41-42.

10. Ахматьянова В.Р. Савченко Я.А. Ковальская Т.Н. Ярунова Е.Н.

Структурно-функциональные особенности генетического аппарата коренных жителей Сибири – шорцев // Материалы Х Международной научной школыконференции студентов и молодых ученых «Экология Южной Сибири и сопредельных территорий». – Абакан: Изд-во Хакасского госуниверситета им.

Н.Ф. Катанова, 2006. - Вып. 10. - Т. 2. – С. 104-105.

11. Дружинин В.Г. Мальцев А.В. Головина Т.А. Ахматьянова В.Р. Фоновый уровень хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови с учетом фактора малой этнической группы / Материалы II межрегиональной научнопрактической конференции «Этносы развивающейся России: проблемы и перспективы». – Абакан - 2007. – С. 180-183.

12. Druzhinin V.G. Golovina T.A. Ahmatianova V.R. Afanasiev B.B. Background Level of Chromosomal Aberrations in Pheripheral Blood Lymphocytes of the Person in a Small Ethnic Group / 5th International Conference on Environmental Mutagens in Human Populations, May 20-24, 2007 - Tekirova, Antalya, TURKEY. - P. 45-46.

13. Ахматьянова В.Р. Остапцева А.В. Глушков А.Н. Дружинин В.Г. Минина В.И. Савченко Я.А. Шабалдин А.В. Гены детоксикации ксенобиотиков у шорцев Кемеровской области / Материалы XII Всероссийской научно-практической конференции. – Томск: Изд-во Том. ун-та, 2008. – Ч. 1. – С. 147-150.

14. Дружинин В.Г. Алукер Н.Л. Ахматьянова В.Р. Волков А.Н. Глушков А.Н. и др. Индивидуальная чувствительность генома и особенности проявления генотоксических эффектов у людей, длительно подвергающихся воздействию повышенных концентраций радона. Изучение возможных механизмов модификации эффектов / Тезисы. докладов итоговой конференции по результатам выполнения мероприятий за 2008 год в рамках приоритетного направления «Живые системы» ФЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007- годы», С. 124-126.

15. Druzhinin V.G. Golovina T.A. Ahmatianova V.R. Minina V.I. Volkov A.N. Larionov A.V. Makeeva E.V. Genome sensitivity and genotoxic effects features in children-teenagers affected by radon radiation in living and educational environment / 6th Conference of the Pan African Environmental Mutagen Society (PAEMS 2008).

November 2-5 2008, Cape Town, South Africa. – P. 81.

16. Лунина А.А. Минина В.И. Дружинин В.Г. Головина Т.А. Ахматьянова В.Р. Индивидуальная генотоксическая чувствительность и полиморфизм генов глутатионсульфотрансфераз у детей-подростков, подвергающихся воздействию радона / Материалы Международной конференции «Биологические эффекты малых доз ионизирующей радиации и радиоактивное загрязнение окружающей среды». Сыктывкар. – Коми Научный центр УрО РАН. – 2009. – С. 75 – 77.

Главная Биология - авторефераты диссертаций. Cпециальность 03.00.00

Похожие работы:

«Волкова Елена Константиновна СИНТЕЗ И ОПТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОЛУПРОВОДНИКОВЫХ НАНОЧАСТИЦ ДЛЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРИМЕНЕНИЙ 03.01.02 – Биофизика Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Саратов 2 Работа выполнена в ГОУ ВПО Саратовский государственный университет имени Н.Г.Чернышевского На кафедре Оптики и биофотоники Научный руководитель. доктор физико – математических наук, профессор Кочубей Вячеслав Иванович Официальные. »

«Новосадова Александра Викторовна МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ ОСЕТРОВЫХ РЫБ У ПОТОМСТВА КУЛЬТИВИРУЕМЫХ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ 03.02.06 ихтиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва Работа выполнена в Федеральном государственном унитарном предприятии Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (ФГУП ВНИРО), г. Москва Научный руководитель. доктор биологических наук. »

«Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ 03.01.02 – биофизика Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Красноярск – Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте химической кинетики и горения Сибирского отделения РАН доктор физико-математических наук Научный. »

«ПОЛЯКОВ Дмитрий Степанович ФИБРИЛЛОГЕНЕЗ БЕТА2-МИКРОГЛОБУЛИНА И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ГЕМОДИАЛИЗНОМ АМИЛОИДОЗЕ 03.01.04 – Биохимия 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург г. Работа выполнена в Отделе молекулярной генетики учреждения Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины Северо-Западного отделения. »

«НИКИТЕНКО Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Борок – Работа выполнена в Бюджетном научном учреждении Республики Калмыкия Институт комплексных исследований аридных территорий в отделе экологических исследований Научный руководитель. доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Официальные оппоненты. Курашов Евгений. »

«РЫБАС Яна Александровна. МОДУЛЯЦИЯ АДГЕЗИВНО – АКТИВНЫХ СТРУКТУР МИКРОБНОГО ЦЕНОЗА ВЛАГАЛИЩА СЕЛЕКТИВНЫМИ МОДИФИКАТОРАМИ ЭСТРОГЕНОВЫХ РЕЦЕПТОРОВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ 03.02.03 – микробиология 14.01.01 – акушерство и гинекология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Москва – 2 Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии медицинского факультета Государственного образовательного бюджетного учреждения высшего. »

«Саптарова Лилияна Минкаировна ТЯЖЕЛЫЕ МЕТАЛЛЫ В СИСТЕМЕ ВОДА-ПОЧВА-РАСТЕНИЕ В УСЛОВИЯХ ОРОШЕНИЯ ТЕХНОГЕННО-ЗАГРЯЗНЕННОЙ ВОДОЙ Специальность 03.02.08 - Экология (биологические наук и) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа – Работа выполнена в Государственном автономном научном учреждении Институт региональных исследований Академии наук Республики Башкортостан Научный руководитель. доктор биологических наук, профессор. »

«Васильева Галина Валериевна СЕМЕННАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ И РОСТ ПОТОМСТВА ЕСТЕСТВЕННЫХ ГИБРИДОВ МЕЖДУ КЕДРОМ СИБИРСКИМ (PINUS SIBIRICA DU TOUR) И КЕДРОВЫМ СТЛАНИКОМ (P. PUMILA (PALL.) REGEL) 03.02.01 – ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте мониторинга климатических и экологических систем Сибирского отделения РАН, г. Томск Научный руководитель. кандидат. »

«УДК 574: 581.9: 502.654 Лукина Наталия Валентиновна ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ ФЛОРЫ И РАСТИТЕЛЬНОСТИ В УСЛОВИЯХ ЗОЛООТВАЛОВ ТЕПЛОВЫХ ЭЛЕКТРОСТАНЦИЙ 03.00.16 -экология, 03.00.05-ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Екатеринбург 2002 Работа выполнена в Уральском государственном университете им. А. М. Горькою Научный руководитель. кандидат биологических наук, старший научный сотрудник ЧИБРИК ТАМАРА CЕMEНОВНА. »

«Подсвирова Ирина Александровна Микробиологический мониторинг патогенов гнойновоспалительных заболеваний в хирургических отделениях и отделении реанимации и интенсивной терапии в многопрофильном стационаре 03.02.03 – микробиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Москва — Работа выполнена в ГБОУ ВПО Ставропольский государственный медицинский университет Минздрава Российской Федерации Научные руководители: Миронов Андрей. »

«КОЛЕСОВА Мария Анатольевна ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ УСТОЙЧИВОСТИ ОБРАЗЦОВ D-ГЕНОМНОЙ ГРУППЫ РОДА AEGILOPS L. К ЛИСТОВЫМ БОЛЕЗНЯМ (ЛИСТОВАЯ РЖАВЧИНА, СЕПТОРИОЗ, ТЕМНО-БУРАЯ ЛИСТОВАЯ ПЯТНИСТОСТЬ) Специальности: 03.00.15 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург - 2007 Диссертационная работа выполнена в отделе иммунитета Государственного научного центра Российской Федерации. »

«ВОЛКОВ Владимир Алексеевич ИЗУЧЕНИЕ КОЛЬЦЕВЫХ И ФИБРИЛЛЯРНЫХ БЕЛКОВ, ПРЕОБРАЗУЮЩИХ ЭНЕРГИЮ ДЕПОЛИМЕРИЗАЦИИ МИКРОТРУБОЧЕК В ДВИЖЕНИЕ. 03.01.02 – биофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель. д.б.н. проф. Ф.И. Атауллаханов Москва, Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Центре теоретических проблем физико-химической фармакологии Российской академии наук. Научный руководитель доктор. »

«Чипанин Евгений Владимирович ЭКОЛОГО-ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОНГОЛЬСКОЙ ПИЩУХИ (OCHOTONA PRICEI THOMAS, 1911) В ГОРНО-АЛТАЙСКОМ ПРИРОДНОМ ОЧАГЕ ЧУМЫ 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Иркутск – 2 Работа выполнена в ФКУЗ Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научноисследовательский противочумный институт Сибири и Дальнего Востока Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав. »

«Хотеев Вячеслав Владимирович ФОРМИРОВАНИЕ РАСТИТЕЛЬНОСТИ НА НЕФТЕЗАГРЯЗНЕННЫХ ТЕРРИТОРИЯХ РАЗЛИЧНЫХ ПОЧВЕННО-КЛИМАТИЧЕСКИХ ЗОН ТЮМЕНСКОЙ ОБЛАСТИ 03.00.16 - Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Тюмень-2003 Работа выполнена на кафедре ботаники и биотехнологии растений Тюменского государственного университета Научный руководитель. доктор сельскохозяйственных наук, профессор Боме Нина Анатольевна Официальные оппоненты. доктор. »

«Айкэбайэр Илахун Распределение 137Cs и 90Sr по фракциям органического вещества серо-коричневой почвы СУАР КНР и поглощение их растениями из водных растворов и разных почв в присутствии различных лигандов (Специалность-03.00.27 – почвоведение 06.01.04 – агрохимия) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2009 Работа выполнена на кафедрах почвоведения и радиологии Российского государственного аграрного университета – МСХА имени. »

«УДК 595.787 ДУБАТОЛОВ Владимир Викторович ЧЕШУЕКРЫЛЫЕ ПОДСЕМЕЙСТВА ARCTIINAE (LEPIDOPTERA, ARCTIIDAE) ПАЛЕАРКТИКИ 03.00.09 – энтомология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Новосибирск – 2007 Работа выполнена в Институте систематики и экологии животных Сибир ского отделения Российской академии наук. Официальные оппоненты. доктор биологических наук. »

«Зиновьев Андрей Валерьевич ЗАДНЯЯ КОНЕЧНОСТЬ ПТИЦ КАК ОРГАН ДВУНОГОЙ ЛОКОМОЦИИ 03.00.08 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 1999 Работа выполнена на Кафедре зоологии позвоночных животных и общей экологии Биологического факультета Московского государственного университета им. М. В. Ломоносова НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: профессор, доктор биологических наук Ф.